公司何為解決老師在實(shí)驗(yàn)中碰到的elisa試劑盒空白值過高的問題，特意親臨實(shí)驗(yàn)室給我們講解，何說：“ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。但是，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果實(shí)驗(yàn)過程中做得不仔細(xì)，也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。下面是在實(shí)驗(yàn)中會影響到elisa試劑盒空白值過高的因素。”
①洗滌
洗滌步驟看似很無聊，其實(shí)很重要，因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料（如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
②封閉
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長封閉時(shí)間。
③抗體濃度
我們通常會按照老師要求的操作步驟做，但是如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過多的一抗或二抗。
④檢測試劑
另一點(diǎn)也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
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