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細胞轉染效率低的原因有哪些?

時間:2020/7/2閱讀:552
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1.質粒DNA或混和液中含有血清。 對策:用無血清培養基或Opti-MEM培養基。
2.質粒DNA和轉染試劑的比率不是zui對策:對大多數細胞而言,質粒DNA和轉染試劑的比例為1:2-1:3,一般要做優化實驗,比例從1:0.5-1:5 逐一檢測。
3.質粒DNA 已部分降解或質量不夠好 對策:用好的質粒純化試劑確保質粒DNA質量,正確保存,確保質粒DNA不被降解。
4.轉染試劑選擇不當。建議選用效率高,毒性低的轉染試劑,比如Entranster試劑。
5.細胞密度不是*,優化細胞密度。
6.混和加入細胞中不含血清。在轉染過程中使用含有血清的培養基,細胞狀態良好有利于轉染效率的提高。
7 .轉染體系中含有抑制物 轉染體系中不應包含EDTA、檸檬酸、磷酸鹽、RPMI、硫酸軟骨素、透明質酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖
8.檢驗轉染效率及表達的方法有問題 使用報告基因來檢測轉染效率,報告基因使你確定目標基因的表達
9.啟動子及增強子不被包裝細胞識別。確認你構建質粒上的啟動子增強子與靶細胞相容。
10.轉染試劑保存不正確,轉染試劑保存在4℃。

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