RT-qPCR原理的三個主要步驟

來源：上海撫生實業有限公司 2025年07月08日 16:43

RT-qPCR原理的三個主要步驟：

1、反轉錄：

·使用逆轉錄酶和特定引物將RNA樣品反轉錄成cDNA。

·該步驟將RNA模板轉化為更穩定且可擴增的DNA形式。

·反轉錄過程中使用特定引物。

2、PCR擴增：

·使用特定引物對cDNA進行PCR擴增，這些引物環繞目標區域。

·PCR是一個循環過程，呈指數級擴增DNA模板的數量。

·PCR反應中包含熒光染料或探針，它們結合到擴增的DNA序列上并發出熒光信號。

3、熒光實時檢測：

·使用實時PCR儀器實時監測熒光信號。

·熒光的數量與每個PCR循環中擴增的DNA數量成比例。

·使用專業軟件分析數據以確定循環閾值（Ct）值，該值表示熒光信號達到特定閾值水平所需的循環數。Ct值用于計算原始樣品中存在的目標DNA量，從而允許進行基因表達或病毒載量等定量分析。

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