現在隨著科技的進步，菌落計數技術日趨完善。主要體現在配置越來越高，功能越來越全。計數的速度越來越快，準確性也越來越高。
為了正確地檢測各種需氧和兼性厭氧菌存在的情況，檢驗時必須遵循以下一些要求和規定：
(一)所用器皿及稀釋液：
1.檢驗中所用玻璃器皿，如培養皿，吸管、試管等必須是滅菌的，并在滅菌前洗滌干凈，不得殘留有抑菌物質。
2.用作樣品稀釋的液體，每批都要有空白對照。如果在瓊脂對照平板上出現幾個菌落時，要追加對照平板，以判定是空白稀釋液，用于傾注平皿的培養基，還是平皿吸管或空氣可能存在的污染。
3.檢樣的稀釋液雖可用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液，但以用磷酸緩沖鹽水為合適，因為磷酸鹽緩沖液對細菌細胞有更好的保護作用，不會因為在稀釋過程中而使食品檢樣中原已受損傷的細菌細胞導致死亡。如果對含鹽量較高的食品(如，醬品等)進行稀釋，則宜采用蒸餾水。
(二)檢樣稀釋：
1.檢樣稀釋時，應以無菌操作稱取(或量取)有代表性的樣品25g(或mL)剪碎放于含有225ml滅菌稀釋液的玻璃瓶內(瓶內預置適當數量的玻璃珠)，經充分振搖作成l：10的稀釋液。如，系肉、魚等固體樣品，剪細于滅菌乳缽內與稀釋液研勻，或與稀釋液同置于滅菌均質器杯或拍擊式均質袋中，使做成均勻的1：10稀釋液。
2.根據食品衛生標準要求或對標本污染情況的估計，將上述1:10的檢樣稀釋液再做成幾個適當的10倍遞增稀釋液。即取1：10稀釋液1mL與9mL稀釋液混和做成l：100的稀釋液，然后依次遞增稀釋，做成1：1000、1：10000等稀釋液。注意每遞增稀釋一次，必須另換1支l mL滅菌吸管，這樣所得檢樣的稀釋倍數方為準確。
3.從吸管筒內取出滅菌吸管時，不要將吸管碰著其他仍留在容器內的吸管的外露部分；而且吸管在進出裝有稀釋液的玻璃瓶和試管時，也不要觸及瓶口及試管口的外側部分；因為這些部分都可能接觸過手或其他沾污物。
4.在作10倍遞增稀釋中，吸管插入檢樣稀釋液內不能低于液面2.5cm；吸入液體時，應先高于吸管刻度，然后提起吸管離開液面，將貼于玻璃瓶或試管的內壁時吸。管內液體調至所要求的刻度，這樣取樣較準確，而且在吸管從稀釋液內取出時不會有多余的液體粘附于管外。
5.當用吸管將檢樣稀釋液加至另一裝有9mL空白稀釋液的試管內時，應小心沿管壁加入，不要觸及管內稀釋液，以防吸管外側部分粘附的檢液也混入其中。
(三)平板接種與培養：
1.將稀釋液加至滅菌平皿內時，應根據食品衛生標準要求或對標本污染情況的估計，選擇2～3個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移lmL稀釋液加入皿內(從皿側加入，不要揭去皿蓋)，最后將吸管直立使液體流畢，并在皿底干燥處再擦一下吸管尖將余液排出，而不要吹出。每個稀釋度應作2個平皿。
2.用于傾注平皿的營養瓊脂應預先加熱使融化，并保溫于45±1℃恒溫水浴中待用。傾注平皿時，每皿內傾入約15~20mL，最后將瓊脂底部帶有沉淀的部分棄去。
3.為了防止細菌增殖及產生片狀菌落，在檢液加入平皿后，應在20分鐘內向皿內傾入瓊脂，并立即使其與瓊脂混和均勻。
4.檢樣與瓊脂混和時，可將皿底在平面上先向一個方向旋轉，然后再向相反的方向旋轉，以使充分混勻。旋轉中應加小心，不要使混和物濺到皿邊的上方。為了保證混和均勻，而不濺及皿邊的上方，可使用自動平皿旋轉儀，直接將加有檢樣的平皿放在旋轉儀上(可同時放4只平皿)，加入瓊脂后，開動電鈕，在數十秒鐘內即可自動左右旋轉而使皿內的檢樣與瓊脂混合均勻。
5.皿內瓊脂凝固后，不要長久放置，然后始翻轉培養，而應于瓊脂凝固后，在數分鐘內即應將平皿翻轉予以培養，這樣可避免菌落蔓延生長。必要時，可先將皿打開倒置(皿底向上)于溫箱內經15~60分鐘使瓊脂表面干燥后，再將皿底移至蓋內倒置于溫箱內培養。這樣可以阻止運動性強的變形桿菌屬、假單胞菌屬和芽胞桿菌屬中一些菌株在瓊脂表面擴展生長。
6.為了控制污染，在取樣進行檢驗的同時，于工作臺上打開一塊瓊脂平板，其暴露的時間，應與該檢樣從制備、稀釋到加入平皿時所暴露的最長的時間相當，然后與加有檢樣的平皿一并置于溫箱內培養，以了解檢樣在檢驗操作過程中有l無受到來自空氣的污染。
7.培養溫度：
應根據食品種類而定。肉、乳、蛋類食品用37℃培養，水產品用30℃培養。培養時間為48±2小時。培養溫度和時間之所以有這種不同的區分，乃是因為在制定這些食品衛生標準中關于菌落總數的規定時，分別采用了不同的溫度和培養時間所取得的數據之故。水產品因來自淡水或海水，水底溫度較低，因而制定水產品細菌方面的衛生標準時，系用30℃作為培養的溫度。
儀表網手機版
儀表網小程序
公眾號：ybzhan
掃碼關注視頻號
手機版
官方微信
采購中心
