細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)步驟

來(lái)源：上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 2025年06月16日 16:17

細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 制備凍存液，凍存液比例：本實(shí)驗(yàn)室采用70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO，不同實(shí)驗(yàn)室及不同細(xì)胞可能略有差異，也可采用55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO；

2. 取形態(tài)良好，處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，對(duì)其消化、離心 (1500rpm離心8min)、計(jì)數(shù)；

3. 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入對(duì)應(yīng)的凍存液，使細(xì)胞密度維持在300-500w/mL；

4. 小心用鑷子打開(kāi)凍存管管蓋，每管分裝1-1.5mL含細(xì)胞的凍存液，擰緊蓋管，做好標(biāo)記。

5. 分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒后直接放-80℃過(guò)夜；

6. 若沒(méi)有程序降溫盒，則按下列順序依次降溫：室溫→4℃20min→-20℃30min→-80℃過(guò)夜，注意轉(zhuǎn)移過(guò)程中要保冷，避免產(chǎn)生溫差或凍存管融化；

7. 從-80℃冰箱取出凍存管迅速轉(zhuǎn)移到液氮長(zhǎng)期保存。

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