成年男女免费视频网站_国产福利精品在线观看_耽美肉文片段_中文字幕一区二区在线播放 - 欧美一级欧美三级在线观看

產品推薦:水表|流量計|壓力變送器|熱電偶|液位計|冷熱沖擊試驗箱|水質分析|光譜儀|試驗機|試驗箱


儀表網>技術中心>技術交流>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

PCR 反應特異性提高方法合集

來源:上海撫生實業有限公司   2025年05月06日 14:16  

 PCR原理是生物學的聚合酶鏈反應。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。

PCR 反應特異性提高的五大方法:

  1. 引物的設計
  引物最好在模板 cDNA 的保守區設計,長度 15-30bp,GC 含量小于 60%,3’端不超過連續三個 G 或 C,堿基分布錯落有致,避免引物自身形成二聚體,設計完成之后,需進行 BLAST 檢測,如果與其他基因不具有互補性,則可以進行下一步實驗。
 
  2. 降落 PCR
  降落 PCR 是一種簡單的降低非特異性產物的 PCR,最大的優點就是可以降低實驗耗時,同時又可以優化實驗的步驟。引物的設計決定退火溫度,退火溫度過高會使 PCR 效率過低,過低則會使非特異擴增過多。這雖然可以通過反復嘗試來優化,但費時費力。降落 PCR 提供了一個較為簡易的優化方法。首先在較高的溫度下擴增,此時雖然擴增效率低,但非特異擴增基本沒有。隨著退火溫度的降低,非特異擴增會逐步增多。但由于此時特異的擴增產物已經達到一定的數量優勢,因此會對非特異擴增產生強烈的競爭抑制,從而大幅提高 PCR 的特異性和效率。
 
  3. 熱啟動擴增
  采用熱啟動方法進行擴增,是除了設計最佳引物之外,提高 PCR 反應特異性好的方式。在一般的 PCR 反應中,試劑的配置需在冰上進行,且要將 PCR 儀預熱,這種方法就類似于熱啟動,能夠一定程度的抑制錯配。但是酶在低溫下也存在活性,只要體系中有 DNA 鏈存在,就會擴增產生非特異性條帶。采用熱啟動的方法就是在達到變性溫度之前wan全抑制酶的活性,而zui有效的方法就是使用熱啟動 Taq 酶(或熱啟動高保真聚合酶)去擴增,它的原理就是采用化學修飾的方法封閉酶的活性中心,當溫度上升到 95℃時恢復活性,指導擴增。
 
  4. 巢式 PCR
  采用巢式 PCR 進行擴增,在多輪擴增結果中提高擴增特異性和靈敏度。與普通 PCR 不同的是,它采用兩對引物進行擴增,首先用第一對引物普通 PCR,然后將第一輪擴增的產物稀釋 100 倍后用第二對引物(巢式引物)二次擴增。因此采用巢式 PCR 可以大大增加困難模板擴增的特異性和有限靶序列的靈敏度。


免責聲明

  • 凡本網注明“來源:儀表網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-儀表網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:儀表網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其它來源(非儀表網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點或和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
聯系我們

客服熱線: 15267989561

加盟熱線: 15267989561

媒體合作: 0571-87759945

投訴熱線: 0571-87759942

關注我們
  • 下載儀表站APP

  • Ybzhan手機版

  • Ybzhan公眾號

  • Ybzhan小程序

企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87759942