作為生物大分子的蛋白質,是一種長鏈高分子化合物,不僅分子量大,而且在溶液中的擴散系數小、黏度大、易受外界溫度、酸度、有機溶劑的影響而并引起結構變化。這增加了蛋白質分離、分析的困難。
蛋白質在物理、化學及功能上的差異為蛋白質的分離檢測提供了基礎。用高效液相色譜法來分析蛋白質是一種近年來發展較快的新型分析方法。Bietz在1983-1984年就對用反相(RP)和尺寸排阻(SE)高效液相色譜來分離小麥蛋白質和玉米蛋白質的實驗進行報導。由于高效液相色譜柱的改進和HPLC技術的迅速發展,HPLC在蛋白質分析研究中越趨成熟。
HPLC分析蛋白質不僅簡便快捷,而且選擇性好,分離效率高,檢測靈敏度高。HPLC的分離模式與檢測辦法多種多樣,根據蛋白質的大小、形狀、電荷、疏水性、功能等特性,以及蛋白質的來源、實驗要求等,可以采用不同的色譜柱和檢測器來分離目標蛋白。根據分離機理,蛋白質的HPLC法可以分成尺寸排阻色譜(SEC),反相高效液相色譜(RP-HPLC)和凝膠滲透色譜(GPC)三大類。SEC 和RP-HPLC 兩種色譜分離模式構成了蛋白質分析的主流。
HPLC法分離蛋白質的不同模式,可對其他領域蛋白質的研究提供強有力的手段。同時這些色譜柱和檢測器都存在各自的側重點,很難找到一種符合全部要求的理想的檢測器和色譜柱,所以利用HPLC法分離檢測蛋白質的研究還會繼續,以發現更方便、快速、靈敏度更高,通用性更好的HPLC分析方法,推動蛋白質化學的發展。
隨著HPLC聯用技術的應用更加廣泛,無疑將進一步促進我國儀器的發展,對我國生命科學研究的發展和環境監測都有重要意義。
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