液相色譜儀始于60年代前,但是真正被大眾所注意的時(shí)候已經(jīng)是60年代后期,不管是理論還是技術(shù),那是一個(gè)具有標(biāo)志性的年代。液相色譜儀開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相,稱為經(jīng)典液相色譜儀法,此方法柱效低、時(shí)間長(常有幾個(gè)小時(shí))。液相色譜儀法是在經(jīng)典液相色譜儀法的基礎(chǔ)上,于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜儀法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,小顆粒具有高柱效,但會引起高阻力,需用高壓輸送流動相,故又稱高壓液相色譜儀法。又因分析速度快而稱為高速液相色譜儀法。也稱現(xiàn)代液相色譜儀。
液相色譜儀的指標(biāo)很多,有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認(rèn)為要看主要技術(shù)指標(biāo),根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn),儀器的主要指標(biāo)有噪音,漂移,zui小檢測濃度,定性定量重復(fù)性等。這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng),回路里去看,去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好,如接好色譜柱,進(jìn)樣閥,并且要通上流動相。因?yàn)槟诜治鲋幸捕际锹?lián)接好以后才可以進(jìn)行分析的,而不是單單用個(gè)檢測器或是泵的。 液相色譜儀法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相,稱為經(jīng)典液相色譜儀法,此方法柱效低、時(shí)間長(常有幾個(gè)小時(shí))。液相色譜儀法是在經(jīng)典液相色譜儀法的基礎(chǔ)上,于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜儀法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,小顆粒具有高柱效,但會引起高阻力,需用高壓輸送流動相,故又稱高壓液相色譜儀法。又因分析速度快而稱為高速液相色譜儀法。也稱現(xiàn)代液相色譜儀。
液相色譜儀法以液體為流動相常見的有以下幾種:
1.高壓:液相色譜儀法以液體為流動相(稱為載液),液體流經(jīng)色譜柱,受到阻力較大,為了迅速地通過色譜柱,必須對載液施加高壓。一般可達(dá)150~350×105Pa。
2. 高速:流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多,一般可達(dá)1~10ml/min。液相色譜儀法所需的分析時(shí)間較之經(jīng)典液相色譜儀法少得多,一般少于 1h 。
3. :近來研究出許多新型固定相,使分離效率大大提高。
4.高靈敏度:液相色譜儀已廣泛采用高靈敏度的檢測器,進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達(dá)10-11g。另外,用樣量小,一般幾個(gè)微升。
5.適應(yīng)范圍寬:氣相色譜法與液相色譜儀法的比較:氣相色譜法雖具有分離能力好,靈敏度高,分析速度快,操作方便等優(yōu)點(diǎn),但是受技術(shù)條件的限制,沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析。而液相色譜儀法,只要求試樣能制成溶液,而不需要?dú)饣虼瞬皇茉嚇訐]發(fā)性的限制。對于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大(大于 400 以上)的有機(jī)物(這些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的 75% ~ 80% )原則上都可應(yīng)用液相色譜儀法來進(jìn)行分離、分析。 據(jù)統(tǒng)計(jì),在已知化合物中,能用氣相色譜分析的約占20%,而能用液相色譜儀分析的約占70~80%。
通過逐漸改變液相色譜儀分析條件,在保證物質(zhì)分離度的前提下,讓難流出的物質(zhì)加速流出,以提高分析效率的方法;不同點(diǎn),程序升溫只能從低柱溫逐步升高,只能改變升溫的速率,而梯度洗脫可以使用多種溶劑,采用復(fù)雜的比例變化來達(dá)到滿意的分離效果,更靈活 4,應(yīng)該是:減小填料粒徑,增加色譜柱長,使用盡量大小均一、外型規(guī)則的填料,使用合適的流速,使用合適的流動相組成,使用合適的固定相。不能依靠理論塔板數(shù)來判斷分離的可能,理論塔板數(shù)描述的是液相色譜儀柱柱效,塔板數(shù)越高,說明色譜柱的分離性能越好(一個(gè)寬泛的概念),但具體到某些物質(zhì)能否互相分離,液相色譜儀應(yīng)該用分離度來描述,兩個(gè)物質(zhì)的分離度大于1.5,說明能互相分離,否則就不能,這個(gè)跟理論塔板數(shù)毫無關(guān)系.