摘要

反相色譜法（Reverse Phase Chromatography, RPC）是分離大多數常規樣品的分離模式，該模式一般比其他色譜模式的普適性更好，令人滿意的分離度也讓反相色譜法成為zui廣泛應用的純化方法。然而反相色譜法對于親水性化合物卻不能很好的分離，使用普通的反相色譜柱，這類親水化合物都難以有效地保留。而Hilic柱（參見圖1）對于這類化合物不僅有合適的保留時間，還有令人滿意的分離度。

圖1 C18柱和Hilic柱的固定相

常州三泰科技公司的SepaFlash^® Hilic柱與快速液相制備色譜系統SepaBean^TM machine結合有著*的分離性能，本文比較了SepaFlash^® Hilic柱與SepaFlash^® C18柱在反相模式下對于兩種強極性化合物的分離效果，實驗結果表明SepaFlash^® Hilic柱有著的分離效果，為此類化合物的分離純化提供了一套且實用的解決方案。

實驗

本文所采用的快速分離柱規格為25g SepaFlash^® Hilic柱以及25g SepaFlash^® C18柱，樣品為胞嘧啶和*的混合物（結構式參見圖2），在上樣量*相同的條件下，利用快速液相制備色譜系統SepaBean^TM machine（參見圖3）進行分離純化，實驗結果清楚的說明了兩種色譜柱對于高極性化合物的不同選擇性。

圖2 兩種強極性化合物（A：胞嘧啶；B：維生素C）

圖3. 快速液相制備色譜系統SepaBean^TM machine[申請試用]

實驗參數設置如表1所示：

結果與討論

根據分離圖譜，我們能準確測得保留時間與峰寬，可用公式計算相應的分離度：

R = 1.18 (t₂ - t₁) / [(W_1/2)₁ + (W_1/2)₂]

式中t₁與t₂分別為相鄰譜峰的保留時間，(W_1/2)₁與(W_1/2)₂是半峰高處測得的峰1和峰2的峰寬。根據公式分別計算圖4和圖5中相鄰譜峰的分離度，SepaFlash^® C18柱中相鄰譜峰的分離度R≈1.53，SepaFlash^® Hilic柱中相鄰譜峰的分離度R≈5.97。通過計算分離度可以看出，SepaFlash^® Hilic柱的分離度要遠遠超過SepaFlash^® C18柱。

圖4  SepaFlash^® C18柱對混合物的分離圖譜

圖5  SepaFlash^® Hilic柱對混合物的分離圖譜

實驗結果表明，SepaFlash^® Hilic柱表現出了的選擇性，成功地保留和分離了胞嘧啶和*的混合物。根據分離圖譜可以看出，即使在SepaFlash^® C18反相柱上以高達95%的水溶液流動相來分離，這兩種強極性化合物也只有很弱的保留，并且混合物樣品沒有得到基線分離。對比C18反相柱的分離結果，我們可以看到混合物樣品在SepaFlash® Hilic柱上不僅有合適的保留時間，而且有理想的分離度。因此，本文中的方法為強極性化合物的快速分離純化提供了一套且實用的解決方案。

關于SepaFlash® 親水性色譜柱

SepaFlash^®親水性色譜柱包括一系列預裝有不同填料的色譜柱，如Hilic柱、氰基柱（-CN）、氨基柱（-NH₂）和二醇柱（-Diol）等（參見表2和圖6），為分離純化強親水性或者強極性的化合物提供了多種選項。

*注：上述固定相均具有5.0g，20g，33g，48g，105g，155g，300g及420g的規格，具體參數請查詢公司上的訂購信息。

圖6. SepaFlash^® 親水性色譜柱產品

關于SepaBean^TM Machine 

SepaBean™ machine是三泰科技（常州）有限公司經過全體科研人員，共同努力開發的一款快速液相制備色譜系統，擁有國家保護。除了常規的分離純化功能外，還具備強大的學習能力和數據共享功能，為科研工作者挑戰更多更復雜的分離純化難題助力。

（本文作者為CBG應用技術研究中心：王玉麟，孫文，徐波，有任何疑問，都可以和我們一起探討）