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生物菌種操作時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)

時(shí)間:2018/7/9閱讀:536
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生物菌種操作時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)
(1)劃分操作區(qū):目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實(shí)現(xiàn)*閉管操作,但無論是否能夠達(dá)到單人單管,均要求實(shí)驗(yàn)操作在三個(gè)不同的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進(jìn)行:
① 標(biāo)本處理區(qū),包括擴(kuò)增摸板的制備;

②PCR擴(kuò)增區(qū),包括反應(yīng)液的配制和PCR擴(kuò)增;
③ 產(chǎn)物分析區(qū),凝膠電泳分析,產(chǎn)物拍照及重組克隆的制備。
各工作區(qū)要有一定的隔離,操作器材,要有一定的方向性。如:標(biāo)本制備→PCR擴(kuò)增→產(chǎn)物分析→產(chǎn)物處理。
切記:產(chǎn)物分析區(qū)的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個(gè)工作區(qū)。

(2)分裝試劑:PCR擴(kuò)增所需要的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的超凈工作臺(tái)或負(fù)壓工作臺(tái)配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中,不能用來吸取擴(kuò)增后的DNA和其他來源的DNA:
①PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水;
② 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)配制;
③ 引物和dNTP應(yīng)分裝儲(chǔ)存,分裝時(shí)應(yīng)標(biāo)明時(shí)間,以備發(fā)生污染時(shí)查找原因。
(3) 實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng) 盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真,在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:
① 戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套;
② 使用一次性吸頭,嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
③ 避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
④ 操作多份樣品時(shí),制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的度;
⑤ *后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管;
⑥ 操作時(shí)設(shè)立陰陽性對(duì)照和空白對(duì)照,即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性;
⑦ 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器*容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū);
⑧ 重復(fù)實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證結(jié)果,慎下結(jié)論。
生物菌種*Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅩ ELISA Kit

*Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅨ ELISA Kit

*Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)ELISA試劑盒 ,英文名: Ⅷ-Ag ELISA Kit

*Ⅷ(FⅧ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅧ ELISA Kit

*Ⅶ(FⅦ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅦ ELISA Kit

*Ⅴ(FⅤ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅤ ELISA Kit

*Ⅲ(FⅢ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅢ ELISA Kit

*Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅡ ELISA Kit

*原肽段1+2(F1+2)ELISA試劑盒 ,英文名: F1+2 ELISA Kit

*原前體蛋白(PIVKA-II)ELISA試劑盒 ,英文名: PIVKA-II ELISA Kit

*原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒 ,英文名: F1+2 ELISA Kit

*原(PT)ELISA試劑盒 ,英文名: PT ELISA Kit

*血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)ELISA試劑盒 ,英文名: T-TM ELISA Kit

*受體(TR)ELISA試劑盒 ,英文名: TR ELISA Kit

*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA試劑盒 ,英文名: TSP-1 ELISA Kit

*抗*復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒 ,英文名: TAT ELISA Kit

*(TM)ELISA試劑盒 ,英文名: TM ELISA Kit

*(Thrombin)ELISA試劑盒 ,英文名: Thrombin ELISA Kit

凝溶膠蛋白(GS)ELISA試劑盒 ,英文名: GS ELISA Kit

凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA試劑盒 ,英文名: Gelsolin ELISA Kit

凝聚素(CLU)ELISA試劑盒 ,英文名: CLU ELISA Kit

凝膠原蛋白(gelson)ELISA試劑盒 ,英文名: gelson ELISA Kit

尿腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體死亡受體4(TRAIL-DR4)ELISA試劑盒 ,英文名: TRAIL-DR4 ELISA Kit

尿游離*(UFC)ELISA試劑盒 ,英文名: UFC ELISA Kit

尿微量白蛋白(MAU/ALB)ELISA試劑盒 ,英文名: MAU/ALB ELISA Kit

尿微量白蛋白(MAU)ELISA試劑盒 ,英文名: MAU ELISA Kit

尿微量白蛋白(ALB)ELISA試劑盒 ,英文名: ALB ELISA Kit

尿素酶相關(guān)蛋白C(UreC)ELISA試劑盒 ,英文名: UreC ELISA Kit

*核苷磷酸化酶1(UPP1)ELISA試劑盒 ,英文名: UPP1 ELISA Kit

*型纖溶酶原激活因子(uPA)ELISA試劑盒 ,英文名: uPA ELISA Kit

*型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒 ,英文名: PLAUR/uPAR ELISA Kit
生物菌種

 

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