在做大鼠elisa免疫檢測試劑盒實驗中,相信大家或多或少難免會出現一些狀況,就在上周五,小編就在貼吧看到有個吧友發帖問在做ELISA實驗,到顯色步驟結束后,酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。那么今天上海勁馬請咱技術人員給大家分析分析
原因分析:試劑已過有效期,或不同試劑盒組分混用,檢查試劑的組分及批號,確認未過期以及所有組分均屬對應的試劑盒。
對策:不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。
整板的黃板現象可能是由于錯加其他試劑造成,如同時操作兩對半試劑時,測HbsAb板用于測HBsAg等;實驗前檢查試劑的組分及批號,確認所有組分均屬于對應的試劑盒。如盛標本的試管四周常有血痂,易脫落,應遠離酶標板。
elisa試劑盒超過有效期的產品可能會產生很弱的信號;試劑盒沒有按規定進行留存,受高溫影響;實驗前檢查試劑的組分及批號,確認試劑未過期。孵育溫度應控制在37-38℃,孵育時間嚴格按照說明書操作,保溫期內不宜多開門,以免影響保溫。花板,一般是由于臨床標本的收集、處理和留存方法不當造成,放置時間(自然放置1~2h)及離心轉(3000r/min)、離心時間(15min)應引起注意。
試劑、樣品用前未平衡至室溫從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應置室溫平衡,20分鐘左右。錯加、漏加試劑底物、顯色劑A或B嚴格按說明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現象。實驗結束后,陰陽性對照正常,質控正常,但臨床標本感覺顯色較弱,待測標本中可能不含強陽性標本,故結果可能是正常的,如有懷疑,可復檢標本加入疊氮鈉作為防腐劑,酶免實驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑,陰陽性對照正常,但質控、參考品或個別弱陽性標本未能檢出。
大鼠elisa免疫檢測試劑盒洗板及加樣過程中,酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力,確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認配制洗液的容器已洗干凈。加樣時交叉污染;加標本時盡量 避免交叉污染。
辣根過氧化物酶標記β-肌動蛋白() 人內*肽-2(EM-2)
辣根過氧化物酶標記白介素6(人)IgG 人內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)
辣根過氧化物酶標記肝細胞生長因子受體(原癌基因蛋白)IgG 人內毒素(ET)
辣根過氧化物酶標記聚*/抗His tag標簽(C端)IgG 人末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)
辣根過氧化物酶標記抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白IgG 人末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)
辣根過氧化物酶標記抗布魯氏菌IgG 人膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)
辣根過氧化物酶標記抗腸致病性大腸桿菌IgG 人膜攻擊復合物(MAC)
辣根過氧化物酶標記抗大腸埃希桿菌O6IgG 人膜輔蛋白(MCP/CD46)
辣根過氧化物酶標記抗大腸埃希氏菌O157IgG 人膜表面免疫球蛋白(SmIg)
大鼠elisa免疫檢測試劑盒
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