根據(jù)ATCC細胞比成纖維細胞培養(yǎng)基貼壁速度慢的特點,并結(jié)合使用不加血清的營養(yǎng)液,把含有兩類細胞的細胞懸液反復(fù)貼壁,使兩類細胞相互分離,操作方法與傳代相同。
細胞離體后,失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細胞間的相互影響,生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境中,易發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象減弱;形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡;或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性,變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此,培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體,它們既保持著與體內(nèi)細胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能,也有一些不同于體內(nèi)細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后,這種差異就開始發(fā)生了。
(1)待細胞生長達一定數(shù)量后,倒出舊培養(yǎng)液,用*消化后,Hanks 沖洗2次,加入不含血清的培養(yǎng)液,吹打制成細胞懸液;
(2)取編號為此A、B、C三個培養(yǎng)瓶;首先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中。置溫箱中靜止培養(yǎng)5~20分鐘后,輕輕傾斜培養(yǎng)瓶,讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液,再接種入B培養(yǎng)瓶中后;向A瓶中補充少許*培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng);
(3)培養(yǎng)B瓶中細胞5~20分鐘后,接處理A的方法,把培養(yǎng)液注入C培養(yǎng)瓶中;再向B瓶中補加*培養(yǎng)基。
當三個瓶內(nèi)都含有ATCC細胞培養(yǎng)液后,均在溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。如操作成功,次日觀察可見A瓶主要為成纖維細胞,B瓶兩類細胞相雜,C瓶可能主要為癌細胞。必要時可反復(fù)處理多次,直至癌細胞純化為止。
對照品 α-對羥基苯* 30mg 對照品
對照品 *二醇物 50mg 對照品
對照品 * 200mg 對照品
標準試劑 乙酰苯胺 200 標準試劑
標準試劑 *酶 2ml 標準試劑
標準試劑 咪唑試劑 100g 標準試劑
標準試劑 對乙酰氨基苯甲醚 200mg 標準試劑
標準試劑 庚烷磺酸鈉 5g 標準試劑
標準試劑 3-乙氧基-4-羥基苯甲醛 100mg 標準試劑
標準試劑 2-苯乙酰胺 65mg 標準試劑
ATCC細胞
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