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321次原代細(xì)胞培養(yǎng)基本信息簡(jiǎn)介
原代細(xì)胞來(lái)源于一塊碎的或酶消化的組織。原代培養(yǎng)物,是多種類(lèi)型細(xì)胞的混合物,保留了其來(lái)源組織的特點(diǎn)。
一段時(shí)間后,原代培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)達(dá)到融合狀態(tài),即在培養(yǎng)瓶中的所有可用空間由于細(xì)胞擴(kuò)增都被覆蓋。在此之后,細(xì)胞需要消化(通常用蛋白水解酶,如胰蛋白酶)為單個(gè)細(xì)胞并且傳代(分裂,傳代或轉(zhuǎn)移)。在*次傳代以后,培養(yǎng)物通常被稱(chēng)為一個(gè)細(xì)胞系。每一次傳代培養(yǎng),細(xì)胞群體由于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞占主導(dǎo)地位而變得更均勻。具有所需特性的細(xì)胞也可以通過(guò)克隆,從培養(yǎng)物中選出。
二倍體細(xì)胞很少可以倍增超過(guò)幾代。它們只有有限的復(fù)制能力,并且在細(xì)胞倍增20至80次后開(kāi)始減緩并Z終停止分裂。Z近的證據(jù)表明,某些細(xì)胞中觀(guān)察到的細(xì)胞衰老與預(yù)計(jì)的復(fù)制性衰老不同,可能是由于不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件導(dǎo)致的。還有其他數(shù)據(jù)顯示,對(duì)某些物種的細(xì)胞系(尤其是人源的)即使生長(zhǎng)在改進(jìn)的培養(yǎng)條件下仍存在復(fù)制衰老。這種衰老是由細(xì)胞分裂時(shí)染色體末端(端粒)縮短調(diào)控的。
正如以上提到的,細(xì)胞系要么在培養(yǎng)瓶表面貼壁生長(zhǎng)(錨定依賴(lài)性)要么懸浮生長(zhǎng)(非錨定依賴(lài)性)。細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂,通常遵循一個(gè)由四個(gè)階段組成的特征性增長(zhǎng)模式:停滯期,對(duì)數(shù)期(指數(shù)期),平穩(wěn)期(平臺(tái)期)和衰退期。
停滯期——將細(xì)胞接種至培養(yǎng)瓶之后,細(xì)胞逐步恢復(fù)的同時(shí),緩慢生長(zhǎng)。
對(duì)數(shù)期(指數(shù)期)——細(xì)胞進(jìn)入一個(gè)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的時(shí)期,一直持續(xù)到整個(gè)生長(zhǎng)表面被占滿(mǎn)或細(xì)胞密度超過(guò)培養(yǎng)基提供營(yíng)養(yǎng)的能力。
平穩(wěn)期——細(xì)胞增殖減慢或停止。
衰退期——如果不更換培養(yǎng)基且細(xì)胞數(shù)量不減少,細(xì)胞活力會(huì)下降,并出現(xiàn)細(xì)胞死亡。
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