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初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)廢棄的處理方法

時(shí)間:2017/12/14閱讀:265
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原代細(xì)胞上清
    取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
4、  細(xì)胞裂解液
1)  吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來(lái)。懸浮細(xì)胞可省略。
2)  收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
3)  加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
4)  將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
5)  4℃ 10000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
組織勻漿液
1)  將組織樣本用PBS (0.01 [錨點(diǎn)] [錨點(diǎn)] M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2)  將組織塊稱(chēng)重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分
3)  將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,檢測(cè)后計(jì)算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
4)  原代細(xì)胞吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本
供檢查用    50mg    101109-201001    山梨醇
供HPLC法    200mg    101116-201001    地塞米松磷酸酯
供檢查用    50mg    101121-201001    非諾貝特雜質(zhì)Ⅰ
供檢查用    50mg    101122-201001    非諾貝特雜質(zhì)Ⅱ
供檢查用    30mg    101124-201001    2-巰基
供檢查用    100mg    101126-201001    1,3-丙二醇
供HPLC法    50mg    101128-201001    可的松
供檢查用    50mg    101132-201001    
供HPLC含量    20mg    101135-201001    消旋山莨菪堿雜質(zhì)I
原代細(xì)胞

 

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