破碎原代細(xì)胞是獲得細(xì)胞各個(gè)組分的*步，也是很關(guān)鍵步驟：破碎不充分，會(huì)影響細(xì)胞器產(chǎn)量；破碎過(guò)度，有時(shí)會(huì)破壞細(xì)胞器。破碎細(xì)胞一般是在低溫條件下，將細(xì)胞在等滲液中制備成細(xì)胞懸液，進(jìn)行破碎細(xì)胞使之成為各種細(xì)胞器及其包含物的勻漿。

(一)勻漿法

勻漿(homogenization)是Z常用的破碎細(xì)胞的方法，一般都要在冰上操作。較為經(jīng)濟(jì)的方法是使用玻璃勻漿器。手動(dòng)玻璃勻漿器由一根端部表面磨砂的玻璃桿和一個(gè)內(nèi)壁磨砂的玻璃套管組成。使用時(shí)，先用鋒利的刀片把組織塊切碎，然后把碎塊加入套管中，用力移動(dòng)玻璃桿使組織細(xì)胞破碎。因?yàn)樵谘心サ倪^(guò)程中會(huì)摩擦產(chǎn)熱，引起蛋白變性，所以一般都在冰上操作，冰上操作還可以抑制細(xì)胞酶活性，防止降解。電動(dòng)玻璃勻漿器和手動(dòng)玻璃勻漿器原理和使用方法相似。

(二)高速組織搗碎機(jī)法

高速組織勻漿機(jī)有高速轉(zhuǎn)動(dòng)的電機(jī)，可以帶動(dòng)鋼制轉(zhuǎn)頭高速旋轉(zhuǎn)，從而剪切樣品、達(dá)到破碎細(xì)胞的目的，可以用于微量樣品的制備。使用時(shí)將待處理細(xì)胞懸于細(xì)胞裂解液中．加入到塑料離心管(因?yàn)榈额^速度過(guò)快，為防止碎裂，盡量避免使用玻璃試管)中，并放置于冰上，將組織勻漿機(jī)的探頭浸入離心管中，然后打開(kāi)電源，緩慢調(diào)整旋轉(zhuǎn)速度，一般開(kāi)機(jī)數(shù)十秒后．組織細(xì)胞即可被高速旋轉(zhuǎn)的探頭破碎。但不宜時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以防高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生熱而導(dǎo)致分離物中的活性物降解。

(三)超聲波處理法

超聲波發(fā)生器能產(chǎn)生高強(qiáng)度的超聲信號(hào)，經(jīng)換能器傳送至與之接觸的溶液中，由聲波形成沖擊和振動(dòng)而產(chǎn)生剪力，致使原代細(xì)胞破碎，一般體外培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞均可在短時(shí)間內(nèi)破碎，因超聲時(shí)可產(chǎn)熱，應(yīng)注意冰浴冷卻，生物大分子如核酸和酶對(duì)超聲敏感，一般不宜采用。如果提取蛋白、多糖等，可采用超聲法降解核酸。超聲法可以和勻漿法相結(jié)合，即先通過(guò)勻漿的方法破碎細(xì)胞，再通過(guò)適當(dāng)?shù)某曔M(jìn)一步裂解。

(四)化學(xué)裂解法

在細(xì)胞懸液中加入Titon X-100、NP-40、SDS、去氧膽酸鈉均可使細(xì)胞裂解，往往仍需機(jī)械法進(jìn)行輔助，方可在短時(shí)間內(nèi)使細(xì)胞*裂解，裂解后應(yīng)清除化學(xué)裂解劑，以防止干擾分析。這些化學(xué)物質(zhì)往往配制成細(xì)胞裂解液。

(五)反復(fù)凍融法

可將細(xì)胞懸浮于細(xì)胞裂解液在一70℃或液氮中冷凍后，迅速于37℃融化，經(jīng)3—4個(gè)凍融周期．可使原代細(xì)胞破碎。如果結(jié)合超聲法，一般來(lái)說(shuō)效果會(huì)更好。