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血細胞的分離技術操作方法

時間:2017/3/2閱讀:356
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(一)材料與試劑 
1.抗凝劑 
(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其鈉鹽或鉀鹽,它能阻止凝血酶原轉化為凝血酶,進而抑制纖維蛋白原形成纖維蛋白,從而阻止血液凝固。常用的肝素溶液濃度為1 000U/ml,市售肝素多為100U~126U/mg。 
(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一種螯合劑。用鹽水配制成4%的溶液備用。 
(3)阿氏液(Alsever液),配方如下: 
枸櫞酸鈉(Na3C6H5O7·5H2O) 0.80g 枸櫞酸 0.0325g 葡萄糖 2.05g 
混勻溶解后,114.3℃高壓蒸汽滅菌10min備用。 
阿氏液中既含有枸櫞酸鈉抗凝劑,又含有細胞生存的營養,所以它既可做抗凝劑,又可做血細胞的保存液。 
2.針頭 根據不同動物和采血部位,采用不同型號的針頭,用前必須滅菌或消毒。 
3.采血容器 注射器或三角瓶等。 
4.采血動物。 

(二)操作方法 
1.采血法 各種動物采血方法不一。馬、牛、羊等大動物一般從頸靜脈采血,豬從頸靜脈、前腔靜脈或耳靜脈采血,家禽由翼下靜脈或心臟采血,兔由心臟或耳靜脈采血,犬由頸靜脈或四肢靜脈采血,豚鼠由心臟采血,小白鼠則可斷尾或剪斷腋下血管或剪斷眼球采血。 
2.抗凝 采集血液Z關鍵的問題是抗凝,采用什么方法進行抗凝,則根據實驗的要求和條件而定。Z常用的方法如下: 
(1)肝素抗凝:采血時,使每ml血液含15U~20U肝素即可。計算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,直接放入采血容器中,采血時,邊采血邊輕輕搖動,使抗凝劑和血液混勻。對于采少量的血液或小動物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,再采血直接抗凝。 
(2)EDTA抗凝:采血前,用滅菌鹽水將EDTA配制成4%溶液,然后按預采血液的量,以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液體量于采血容器內。采血,并不斷搖動采血容器,使之混勻。 
(3)玻璃珠法:預先將適量的玻璃珠(根據采血量多少而定)清洗后,裝入采血容器中,滅菌后備用。采血過程中,邊采邊搖采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滾動,以機械地除去纖維蛋白,使血液不能凝固。本法雖較麻煩,但對淋巴細胞的活性影響Z小,且可減少血小板的混雜。 
(4)阿氏液采血:以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液,邊采邊輕輕搖動采血瓶,使之混勻。用阿氏液采血,除了抗凝外,多用于紅細胞的保存。一般在4℃條件下,阿氏液中保存的紅細胞2周其活性和特性不變。

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