上海晶抗生物工程有限公司
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閱讀：153發布時間：2017-8-8
ELISA試劑盒操作步驟
1. 加樣：規范品設定5個濃度點10個孔，每個濃度設定平行孔，參加50微升不同濃度的規范品，空白孔設定1個孔參加50微升蒸餾水（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其他各步操作相同）、待測樣品孔，在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終究稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動混勻。
2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗刷液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
4. 洗刷：當心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
5. 加酶：每孔參加酶標試劑50μl，空白孔在外。
6. 溫育：操作同2。
7. 洗刷：操作同4。
8. 顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9. 停止：每孔加停止液50μl，停止反響（此刻藍色立轉黃色）。
10. 測定：以空白空調零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加停止液后15分鐘以內進行。
ELISA試劑盒注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可運用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗刷液可能會有結晶分出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗刷時不影響成果。
3． 各步加樣均應運用加樣器，并常常校正其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時刻控制在5分鐘內，如標本數量多，*運用排槍加樣。
4． 請每次測定的一起做規范曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于規范品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，核算時請zui終乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性運用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格依照說明書的操作進行，試驗成果斷定有必要以酶標儀讀數為準.
8． 一切樣品，洗刷液和各種廢棄物都應按感染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
ELISA試劑盒核算：
以規范物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出規范曲線，依據樣品的OD值由規范曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用規范物的濃度與OD值核算出規范曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，核算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實踐濃度。
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