因此在ELISA試劑盒測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。在標本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯(吐溫,Tween)一類物質(zhì)即右達到此目的。
●檢驗項目的基本原理 (ELISA試劑盒原理)根據(jù)檢測目的和操作步驟不同有三種基本方法。
●雙抗體(原)夾心法 檢測抗原(體)的常見方法,應(yīng)用針對抗原兩個不同決定族的兩種單抗分別作為固ELISA試劑盒相載體和酶標抗體檢測溶液中的抗原(適用于二價以上抗原,不能測 小分子半抗原)。
●間接法 檢測抗體的方法,利用酶標記的抗抗體(第二抗體)檢測已與固相抗原結(jié)合的抗體。
●競爭法 檢測抗原或小分子半抗原、抗體,以測抗原為例,使待測抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合,結(jié)果如待測抗原含量越多,與固相抗體結(jié)合的酶標抗原就越少,顯色越淺,二者呈負相關(guān)。
ELISA試劑盒過程中不是反應(yīng)聚,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯待塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水*脂肪酸酯,為非離子型的表面張力物質(zhì),常作為助溶劑。根據(jù)脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號,結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯20,在ELISA中zui為常用。它的洗滌效果好,并具有減少非特異性吸附和增強抗原抗體結(jié)合的作用。
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