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偶聯ELISA試劑盒與親和素和*
一、親合素主要包括卵白親合素、鏈親合素、卵黃親合素及類親合素等。后兩種因其特異性親合力低,研究不多,前兩種目前已深入研究并得到廣泛應用。
親合素又稱卵白素或抗*,分子量為68000,pI 10~10.5;在pH9~13緩沖液中性質均穩定,耐熱并耐多種蛋白水解酶的作用。天然親合素為堿性蛋白,由4個相同的亞單位構成4聚體;每個親合素亞單位通過其結構中的*殘基與*中的Ureido環(I環)結合。因此,1個親合素分子存在4個與*分子結合位點,其結合常數(Ka)高 達1015mol/L。通常,親合素的活性單位是以親合素結合*的量來表示的,即以能結合1ug*所需要的親合素量為1個親合素活性單位。一般1ug親合素約含13~15個活性單位。
二、*又稱維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物,*-羥基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成*醫學教育網整理化的產物。親和素與*的結合,雖不屬免疫反應,但特異性強,親和力大,兩者一經結合就極為穩定。由于1個親和素分子有4個*分子的結合位置,可以連接更多的*化的分子,形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和*與ELISA試劑盒偶聯起來,就可大大提高ELISA試劑盒的敏感度。
親和素-*系統在ELISA試劑盒中的應用有多種形式,可用于間接包被,亦可用于終反應放大。可以在固相上先預包被親和素,原用吸附法包被固相的抗體或抗原與*結合,通過親和素-*反應而使*化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量,而且使其結合點充分暴露。另外,在常規ELISA試劑盒中的酶標抗體也可用*化的抗體替代,然后連接親和素-酶結合物,以放大反應信號。
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