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細(xì)菌培養(yǎng)之單一菌落 (single colony)分離

時(shí)間:2013-2-22閱讀:360
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藥品試劑:
E. coli K-12 菌株 (JM109)
LB agar plates:
1% (w/v) Bacto tryptone, 0.5% Bacto yeast extract, 1% NaCl,以5 N NaOH 調(diào)至pH 7.0 后,加入1.5% (w/v) Bacto agar,以濕熱法滅菌。

方法步驟:
1) 每組取一個(gè)LB plate,在培養(yǎng)皿底部標(biāo)明組別及日期,并寫上JM109。
2) 將接種環(huán)在酒精燈火焰上燒紅,接種環(huán)上方部份亦得以火焰燒過(guò)。另一手將生長(zhǎng)有JM109 之培養(yǎng)皿蓋子拿起數(shù)吋,將接種環(huán)在培養(yǎng)基空白處輕戳數(shù)次以使冷卻。
◆ 注意! 蓋子請(qǐng)勿全開或置于實(shí)驗(yàn)桌上!
◆ 接種環(huán)請(qǐng)勿放置在桌上或接觸到其它東西!
3) 以接種環(huán)輕輕刮下菌落,并將培養(yǎng)皿蓋子置回。
4) 打開空白的LB plate,將沾有菌落的接種環(huán)于其上輕輕連畫數(shù)條橫線后,將培養(yǎng)皿蓋子置回。
5) 再次將接種環(huán)在酒精燈火焰上燒紅 并使冷卻。 將培養(yǎng)皿旋轉(zhuǎn)約60 度,畫第二次線。
6) 重復(fù)上一步驟之操作,畫第三次線。
7) 將接種環(huán)在火焰上燒紅滅菌后方可置回實(shí)驗(yàn)桌上。
8) 將培養(yǎng)皿倒置,于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。
 

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