[方法]
1．配制50ul PCR反應(yīng)混合液， 包含：
● 水，34．5ul
● 20XdNTP（每種5mmol／L）， 2，5ul
● 10XVent聚合酶緩沖液，5．0ul
● LMB3引物（10pmol/u1），2．5ul
● scF討HXhoFOR引物（10pmol/ul），2．5ul
● scFv模板DNA（100ng）， 2．0u1
● VentDNA聚合酶（2單位），1．0u1
2．在有加熱蓋的熱循環(huán)儀內(nèi)加熱反應(yīng)混合液到94℃，5分鐘。
3．以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分鐘的條件共循環(huán)25次，擴(kuò)增VH基因。
4．用Wizard PCR純化試劑盒芝之PCR產(chǎn)物。
5．用XhoI和NcoI消化PCR產(chǎn)物；但除了用XhoI替代 NcoI，還需在NEB2緩沖液中進(jìn)行消化。
6．制備VL基因文庫載體；但需用XhoI和NcoI消化載體.
7．連接已消化的PCR產(chǎn)物和已消化的載體，并電轉(zhuǎn)化到大腸桿菌TG1中,構(gòu)建輕鏈改組文庫。