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上海金穗生物科技有限公司
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ELISA法檢測絲蟲抗體

時間:2012/10/12閱讀:424
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  絲蟲病(filariasis)在我國是由斑氏和馬來絲蟲寄生于人體淋巴系統(tǒng)所引起的慢性寄生蟲病,通過蚊蟲傳播。早期臨床特征主要為淋巴管炎和淋巴結(jié)炎,晚期為淋巴管阻塞形成象皮腫。常用的檢查方法是用ELISA

法檢測絲蟲抗體。
    [檢測方法]  ELISA法
    [方法學原理]  將微絲蚴固定在玻片上制成固相抗原片,加入待檢血清和酶標記抗體后,若待檢血清中存在相應抗體,則形成的抗原抗體復合物附著在玻片上。加入相應底物后顯色,在顯微鏡下進行觀察。
    [標本準備]  不抗凝靜脈血2ml。
    [試劑]
    1.微絲蚴固相抗原片
    2.底物溶液
    3.0.2mol/LpH7.6硼酸緩沖液
    4.HRP-抗人IgG
    5.洗滌液與稀釋液
    [檢測步驟]
    1.于抗原點片上滴加1:40和1:80稀釋的待檢血清,在37C環(huán)境中濕盒2h。
    2.流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次,每次5min。
    3.滴加適濃度HRP-抗人IgG,在37℃環(huán)境中濕盒1h。
    4.流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次,每次5min。
    5.滴加底物1滴于低倍顯微鏡下觀察。
    [結(jié)果觀察]  觀察200條微絲蚴,反應結(jié)果判定如下。
    3+  >95%微絲蚴呈棕色或橙色;
    2+  ≥50%微絲蚴呈棕色或橙色;
    1+  ≥5%微絲蚴呈棕色、橙色或淺棕色;
    ±  <5%微絲蚴呈淺棕色或橙色;
    一  微絲蚴無色或稍呈淺黃色。
    凡血清1:40和1:80均為陽性反應(+一+++)者,定為陽性;1:40為“+”或“土”,定為可疑;1:40為“-”者定為陰性。
    [參考范圍]  絲蟲抗體陰性
    [注意事項]
    1.試驗前試劑應在室溫環(huán)境中平衡30min。
    2.洗滌時應注意不能將玻片上的固相抗原沖掉。
    [臨床意義]  絲蟲病潛伏期4個月至15年,平均1年左右。流行區(qū)可有50%-75%的“無癥狀”感染者。ELISA法檢測絲蟲抗體陽性可對該病進行確診,陰性不能排除絲蟲病感染。
    1.急性期  突出癥狀為淋巴結(jié)炎、淋巴管炎、精囊炎、絲蟲熱等。
    2.慢性期  由于炎癥反復發(fā)作,使淋巴管和淋巴結(jié)因增生的肉芽組織阻塞,出現(xiàn)*的臨床癥狀和體征。

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