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酶聯(lián)免疫試劑盒正確操作步驟

時間:2022/7/29閱讀:336
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酶聯(lián)免疫試劑盒正確操作步驟

酶聯(lián)免疫試劑盒,即ELISA,是酶免疫測定技術中應用的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,后者用于測定特異抗體。酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟:1. 確定檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目。2. 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。3. 酶標板加上蓋,37℃反應90分鐘。4. 反應后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體;或甩去酶標板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。5. 將準備好的抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。7. 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應,反應過程中,要經(jīng)常的觀察,當肉眼可見標準品的前3-4孔有 明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應最長不要超過30分鐘)。10. 用酶標儀在450nm測定O.D.值。11. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應該×N。

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