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qPCR擴增過程與CT值有關要素

時間:2025/2/17閱讀:256
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    Ct值qPCR擴增過程中,擴增產物的熒光信號達到設定的熒光閾值時的所對應的擴增循環數(Cycle Threshold)。

CT值與有關要素:

    閾值循環數Threshold cycle (Ct) 也寫作Cq值,熒光信號大于熒光閾值時PCR循環數。儀器軟件通常將第3-15個循環的熒光值設為基線(baseline),是由于測量的偶然誤差引起的。閾值(threshold)一般是基線的標準偏差的10倍。在實際操作中也可以手動調節。高于閾值的熒光信號被認為是真實的信號,用于定義Ct值。Ct會受到閾值的影響,每次試驗由于樣品和儀器的不同會導致基線不同,進而影響閾值和Ct值。

    模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的對數存在一定線性關系,起始模板量濃度越高,Ct值越小;起始模板量濃度越低,Ct值越大。PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,Ct值的重現性較好,即相同含量的初始模板,得到的Ct值是相對穩定的。

    Ct值不是恒定不變的,可以受到不同樣品、不同儀器的影響,即使相同的樣品在相同的儀器上重復2遍,Ct值也會存在差異。


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