【儀表網(wǎng) 研發(fā)快訊】近日，大連化學(xué)物理研究所生物技術(shù)研究部生物分子結(jié)構(gòu)表征新方法研究組(1822組)王方軍研究員團隊與南方科技大學(xué)董哲副教授團隊合作，發(fā)展了一種蛋白質(zhì)疏水功能熱點原位三氟甲基化標(biāo)記和質(zhì)譜探測的新方法，為蛋白質(zhì)疏水作用位點發(fā)現(xiàn)和功能研究提供了新手段。
 

　　蛋白質(zhì)在折疊過程中會形成具有親水表面和疏水內(nèi)核的有序結(jié)構(gòu)，其中蛋白質(zhì)功能性疏水位點(口袋)在小分子識別、藥物結(jié)合、配體與受體相互作用、酶催化等過程中起到關(guān)鍵作用。高效探測蛋白質(zhì)疏水熱點對于蛋白質(zhì)功能機制研究和藥物發(fā)現(xiàn)等具有重要意義。
 

　　在本工作中，研究團隊發(fā)現(xiàn)當(dāng)三氟甲基亞磺酸鈉標(biāo)記試劑(NaSO2CF3)和蛋白質(zhì)在水溶液中預(yù)混合時，疏水性三氟甲基基團將誘導(dǎo)標(biāo)記試劑在蛋白質(zhì)疏水位點內(nèi)預(yù)富集，并與芳香氨基酸側(cè)鏈形成陽離子-π(cation-π)相互作用；進一步在365nm紫外光的激發(fā)下可以實現(xiàn)蛋白質(zhì)疏水位點內(nèi)的芳香氨基酸殘基的選擇性三氟甲基化標(biāo)記。研究團隊對肌紅蛋白(holo-Mb)、人血清白蛋白(HSA)和鹵代烴脫鹵酶(HLDs)等模式蛋白進行了原位三氟甲基化標(biāo)記和質(zhì)譜分析，均能成功探測到蛋白質(zhì)-小分子、蛋白質(zhì)-藥物疏水作用位點和催化功能中心。該方法無需引入催化劑和有機溶劑，具有高生物兼容性，結(jié)合質(zhì)譜無差別和高靈敏度分析可實現(xiàn)蛋白質(zhì)功能疏水位點的高效探測，為蛋白質(zhì)功能分子機制研究和藥物發(fā)現(xiàn)等領(lǐng)域提供了創(chuàng)新方法。
 

　　王方軍團隊致力于極紫外激光解離質(zhì)譜新儀器研制和原位化學(xué)標(biāo)記-結(jié)構(gòu)質(zhì)譜新方法研究，在蛋白-蛋白、蛋白-藥物、蛋白-納米材料等非共價作用位點表征方面取得了系列進展(Nat Protoc.，2023；J. Am. Chem. Soc.，2023；J. Am. Chem. Soc.，2023；Cell Chem. Biol.，2022；CCS Chem.，2022； Anal. Chem.，2022；Chem. Sci.，2021)。
 

　　上述工作以“Probing the functional hotspots inside protein hydrophobic pockets by in situ photochemical trifluoromethylation and mass spectrometry”為題，于近日發(fā)表在《化學(xué)科學(xué)》(Chemical Science)上。該工作的第一作者是我所1822組博士研究生賴燦，該工作得到了國家重點研發(fā)計劃、國家自然科學(xué)基金和我所創(chuàng)新基金等項目的資助。(文/圖 賴燦)