產(chǎn)品名稱 | 原代小鼠晶狀體上皮細(xì)胞 | 英文名稱 | Mouse Lens Epithelial Cells |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 貨號(hào) | GOY-01X1063 |
組織來(lái)源 | 晶狀體組織 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠晶狀體上皮分離自晶狀體組織；晶狀體源自胚胎發(fā)育外胚層，僅含有上皮細(xì)胞及其產(chǎn)物，晶狀體囊膜作為屏障將晶狀體與其它類型細(xì)胞wan全分開；因而，晶狀體上皮細(xì)胞培養(yǎng)既無(wú)神經(jīng)和血管組織的干擾，又不受其它類型細(xì)胞如成纖維細(xì)胞的污染，保證了培養(yǎng)中細(xì)胞成分的單一性。晶狀體上皮細(xì)胞主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)晶狀體的生理平衡，包括電解質(zhì)和液體的輸送。在正常的發(fā)育過程中，晶狀體上皮細(xì)胞分化和成熟，然后遷移到晶狀體內(nèi)部，產(chǎn)生晶體蛋白，自身也拉長(zhǎng)而變成晶狀體纖維細(xì)胞，并最終失去細(xì)胞核和其它的細(xì)胞器。研究表明，晶狀體上皮細(xì)胞的分化和極化受到了眼部液體中的生長(zhǎng)因子的調(diào)控，包括表皮生長(zhǎng)因子和胰島素等。細(xì)胞貼壁后為扁平不規(guī)則多角形，呈單層生長(zhǎng)、連成膜狀。晶狀體上皮細(xì)胞是緊密貼附于晶狀體前囊內(nèi)表面的單層上皮細(xì)胞，其異常增殖和分化與白內(nèi)障和后囊混濁的發(fā)生密切相關(guān)，體外培養(yǎng)是研究其生長(zhǎng)規(guī)律的主要手段。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠晶狀體上皮采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠晶狀體上皮經(jīng)BFSP2（晶狀體蛋白）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，
2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中，盡可能的除去結(jié)締組織等，
3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，
4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會(huì)飄起來(lái)，
5) 每3d換液2mL，待細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)后，隔2d換液，待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時(shí)，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；JF-IgD | 小鼠雜交瘤細(xì)胞株；Sm-IgM |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；LB_001 | 錦鯉皰疹病毒（KHV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；3D5 | 鯉春病毒血癥病毒（SVCV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；VP13-6G10 | 草魚出血病III型病毒（GCRV III）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；VP13-3C11 | 草魚出血病I型病毒（GCRV I）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；HBsAg-5H2 | 刺激隱核蟲核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；5E4G5 | 鯉皰疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
鼠激缺陷細(xì)胞株 | 空腸彎曲菌(CJ)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；3D-2A10-IgA | 石斑魚虹彩病毒（GIV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；3D-2A10-IgG | 細(xì)胞腫大病毒屬虹彩病毒（ISKNV/RSIV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；3D-3A12-IgA | 赤點(diǎn)石斑魚神經(jīng)壞死病毒（RGNNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；N2D1 | 傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；5C8H5 | 原代小鼠晶狀體上皮細(xì)胞對(duì)蝦肝胰腺壞死性細(xì)菌（NHPB）核酸檢測(cè)試劑盒 |
小鼠雜交瘤細(xì)胞株；4E11 | 對(duì)蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
病毒性出血性敗血癥病毒（VHSV）RNA檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法） | 急性肝胰腺壞死病（AHPND/EMS）病原核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span> |
1、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
2、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至15ml無(wú)菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細(xì)胞，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)面積大小的培養(yǎng)皿中；
3）放置于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
