碧云天生產的植植物原生質體分離試劑盒(Plant Protoplasts Isolation Kit)，是一種能夠簡單、快捷地通過酶學方法消化植物尤其是擬南芥(Arabidopsis thaliana)細胞壁中的纖維素并釋放出大量且具有生物活性的原生質體的試劑盒。使用本試劑盒分離出的原生質體可用于質粒DNA轉染以及原生質體融合等實驗研究。

植物原生質體是指去除掉細胞壁后由細胞膜包被的具有生命活力的植物細胞體。植物細胞壁的主要成分為纖維素(cellulose)，半纖維素(hemicellulose)和果膠(pectin)等。植物細胞壁組分被適當的酶消化降解后，就能釋放出無細胞壁包被的植物原生質體。原生質體是開展一系列植物細胞研究的重要材料，可以用于短時間基因表達(transient gene expression)、病毒感染(viral transfection)、體細胞雜交(somatic hybridization)、電生理研究(electrophysiological study)和形態學研究(morphological study)等，從而在植物亞細胞定位(subcellular localization)、蛋白活性分析以及蛋白與蛋白相互作用(protein-protein interaction)等研究方面發揮重要作用。

使用本試劑盒處理擬南芥葉片所獲得的原生質體效果圖(圖1)：

圖1. 碧云天生產的植物原生質體分離試劑盒(Plant Protoplasts Isolation Kit)分離制備的擬南芥原生質體效果圖。酶解體系配制(5ml)：稱取0.095g Enzyme Mix，加入2.5ml 2X Digest Buffer，55℃水浴10min使酶充分溶解，冷卻至室溫后，分別加入100μl Digest Solution I，10μl Digest Solution II和50μl Digest Solution III，加無菌水定容至5ml，輕輕混勻并溶解后，用0.45μm針頭濾器(FF365)過濾。生長狀態良好的擬南芥葉片20片，去除葉片的基部，用刀片(FS205)切成0.5-1mm小條，浸入細胞壁消化液中，真空干燥器抽真空30min，避光條件下消化3h后，輕輕搖動并吸取少量消化液在光學顯微鏡下觀察游離的原生質體(圖A)。消化比較充分后，將所得原生質體溶液用1X Dilution Buffer進行等體積稀釋，再用70μm孔徑的細胞過濾器(FSTR070)過濾所獲得的原生質體溶液，以去除未消化葉片，室溫下100g離心1min，去除上清，將其重懸于500μl Resuspension Buffer中，吸取100μl重懸的原生質體，光學顯微鏡下觀察原生質體的數量與形態(圖B)。實際的檢測效果會因檢測條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

按照每次使用5ml細胞壁酶消化體系計算，本試劑盒可用于20次細胞壁酶消化反應。本試劑盒每個5ml反應體系可處理0.1g左右的擬南芥葉片(約10~15葉片)，操作較好的情況下每5ml體系可獲得約50-70萬個原生質體(不同植物不同操作會有一定的差異)，可滿足約25-100個樣品的原生質體質粒轉染操作(按照每樣1-2萬個細胞計算)。

-20℃保存，至少一年有效。C0362S-2 Enzyme Mix可長期4℃保存，其余組分4℃存放數天不會影響使用效果。數天內連續使用的情況，可以全部保存在4℃。

細胞壁消化液必須現配現用，不能配制后凍存用于后續用途。

請按照試劑盒要求的保存條件存放相關試劑，使用時請將各溶液充分融解并混勻，盡量避免過多的反復凍融。

2X Digest Buffer (C0362S-1)以及Resuspension Buffer (C0362S-7)容易被微生物污染，使用時須嚴格按照無菌操作規范進行或者適當分裝后使用。

所制備的原生質體如果后續需要用于轉染、培養等相對較長時間的用途，所有操作都必須按照無菌操作規范進行。

需使用者自備的實驗儀器與耗材：水浴鍋(E0530)，0.45μm針頭濾器(FF365)，手術刀片(FS205)，平頭鑷子(FS035)，70μm細胞過濾器(FSTR070)以及離心管等其它耗材。

本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

植物原生質體分離試劑盒