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商品屬性：
產品名稱 | |
規格 | 50管/24樣 |
檢測方法 | 可見分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6720 |
商品介紹：
測定意義
海藻糖是功能性低聚糖，具有非還原性、保濕性、熱酸穩定性、抗凍結性等特性，是細胞在不良環境條件下產生的一種重要的抗逆應激物之一，它對生物大分子和生物體組織有著非特異性的保護作用。海藻糖合成酶（Trehalose Synthase）催化麥芽糖合成海藻糖，是海藻糖生物合成的關鍵途徑之一。
測定原理：
TS催化麥芽糖產生海藻糖，使用糖化酶分解剩余麥芽糖為葡萄糖，通過葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖含量，按照麥芽糖減少的量表示海藻糖合酶活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實驗方法學：
一、肝素的配制： 市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。 肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉動，每隔5～10分鐘轉動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集： 全血根據收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
5-基苯酞 97%亞鈉 CP（劇品）Tenascin 固生蛋白抗原
2-氯烯 99%仲丁 99%TEM 1/CD248(Tumor endothelial marker 1 precursor) 內涎蛋白/內皮唾液酸蛋白抗原
2--3-甲基吡 98%N,N-二甲基乙 99%TFF3 (trefoil factor3) 三葉肽因子3(多肽)
2-氯甲基-3,5二甲基-4-甲氧基吡鹽酸鹽 98%異佛爾酮二 99%TFPI-2 (tissue factor pathway inhibitor-2) 組織因子途徑抑制劑-2抗原
環 98%乙酰乙酸基烯酸乙酯 95%TIEG1/KLF10(TGF-beta inducible early response gene 1) TGF-β誘導早期應答基因1抗原
環基酮 98%2,2-雙(羥甲基)酸 98%TGF- BetaR1/ALK (TGF-beta receptor type I) 轉移生長因子–β受體1抗原
4-氯-4'-氟苯丁酮 97%1，4-丁二 AR,98%Thioredoxin 1(ERdj5) 硫氧還蛋白抗原
6-氯-2-己酮 98%1,3-丁二 99%Tie1/JTK14 peptide 上皮生長因子樣域激1抗原
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操作步驟:
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。
