培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:甲基綠染色液
英文名稱:Methyl Green Staining Solution
產品規格:100ml
貨號:FS-X9767
產品介紹:
本染色液是一種組織或細胞染色時常用的可以把細胞核染成綠色的染色液。甲基綠可以和細胞核中的DNA結合,從而產生細胞核染色。本染色液可以和免疫熒光染色或免疫組化染色配合使用。一方面可以在本甲基綠染色液染色后進行免疫熒光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫組化染色后再進行甲基綠復染。一個包裝的本染色液至少可以染色200個樣品。 注意事項: 1. 需自備4%多聚、70%乙醇和95%乙醇。如果需要脫水、透明和封片處理,還需自備二甲苯,中性樹膠或其它封片劑。如果樣品是石蠟切片,需自備90%乙醇,無水乙醇以及二甲苯。 2. 第一次使用本試劑盒時建議先取1-2個樣品做預實驗。 儲存條件:室溫,有效期一年。 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
天冬酰胺內肽(LGMN)英文名:LGMN 軟骨衍生形態發生蛋白1抗體包裝5g
天冬酰胺合成(ASNS)英文名:ASNS β-酪蛋白抗體包裝100g
天冬轉2(AST2)英文名:AST2 21號染色體開放閱讀框63抗體包裝25g
天冬轉(AST)英文名:AST 4號染色體開放閱讀框52抗體包裝1g
套膜蛋白(iNV)英文名:iNV 4號染色體開放閱讀框40抗體包裝5g
糖原磷化M(PYGM)英文名:PYGM Cullin3抗體包裝1g
糖原磷化L(PYGL)英文名:PYGL 分裂周期同源蛋白40抗體包裝5g
糖原磷化B(PYGB)英文名:PYGB 卷曲螺旋結構域蛋白106抗體包裝100g
糖原合激3α(GSK3α)英文名:GSK3α 染色質修飾蛋白1A抗體包裝25g
糖皮質激受體β(GRβ)英文名:GRβ 葉綠體伴侶蛋白抗體(蘋果)包裝100g
糖皮質激受體α(GRα)英文名:GRα 分裂周期蛋白20B抗體包裝25g
糖抗原125(CA125)英文名:CA125 周期調控蛋白D1抗體包裝100ml
碳酐Ⅸ(CA9)英文名:CA9 周期蛋白B1結合蛋白1抗體包裝25ml
碳酐Ⅱ(CA2)英文名:CA2 周期調控因子14A抗體包裝500ml
碳酐Ⅰ(CA1)英文名:CA1 第七號染色體開放閱讀框12抗體包裝1g
膠紅酵母Rhodotorula│mucilaginosa 質量規格:效價測定組蛋白H2b試劑盒澤瀉A-24-醋酯;Alisol A
白鱗蘑菇Agaricus│bernardii Quél. 質量規格:>750ug /mg,USP,培養級組試劑盒棕櫚酯;Methyl hexadec
深海海旋菌Thalassospira│profundimaris 質量規格:含量測定足標記蛋白/足盂蛋白試劑盒左旋千金藤啶堿;L-Stepholidi
甲基綠染色液腫囊腐霉 4-氟-2-色P4501A2
立枯絲核 4,5-二氨基-1-(2-)吡唑硫鹽色P4502E1
大腸埃希 氟化鋅四水合物色P450c21A;21-羥化
無色殼囊孢 基阿維鹽外基質金屬蛋白誘導因子
角磷灰鵝膏 4-乙酰基丁基乙酯外基質磷糖蛋白
匍匐曲霉 乙酰酮釔水合物外信號調節激
隆紋黑蛋巢 5-氧代-己甲酯外信號調節激
枯草芽孢桿 四苯基四苯基磷纖維連接蛋白
長枝木霉 3-溴異煙因子信號轉導抑制因子1
腹膜蒼黃球 3-溴-4-基吡啶因子信號轉導抑制因子3
球孢白僵 結晶紫內酯周期D1
多殺性巴氏桿* 3,5-二異煙周期E1
鮑氏不動桿 比馬前列周期抑制蛋白p27;Kip1
釀酒酵母 2-溴-5-基吡啶細絲蛋白A
類干酪乳桿 丁環己酯下游轉錄因子Gli1蛋白
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)